人泛素结合酶ELISA试剂盒的样品收集及保存方法对于确保实验结果的准确性至关重要。以下是详细的样品收集及保存步骤:样品收集
1. 血清样品:使用不含热原和内毒素的试管收集全血标本,避免任何细胞刺激。收集后,在室温放置2小时或4°C过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即血清。血清可置于-20°C或-80°C保存,但需避免反复冻融。
2. 血浆样品:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂采集标本。采集后30分钟内于2-8°C条件下1000×g离心15分钟,取上清即血浆。同样,血浆可置于-20°C或-80°C保存,但需避免反复冻融。
3. 组织匀浆:取适量组织块,于预冷PBS中清洗去除血液,称重后剪碎。移入玻璃匀浆器,加入5-10mL预冷PBS进行充分研磨,该过程需在冰上进行。匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理。制备好的匀浆液于5000×g离心5分钟,留取上清备用。
4. 细胞培养上清液:贴壁细胞需先用胰酶消化,离心收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。将收集到的细胞用冷PBS洗3次后,物理方法裂解细胞(如超声破碎或反复冻融)。裂解后的标本于2-8°C条件下1500×g离心10分钟,收集上清备用。
样品保存
1. 保存条件:所有样品均应密封保存,避免污染。短期(如一周内)可保存于4°C,但长期保存应置于-20°C或-80°C,且-20°C保存不超过1个月,-80°C保存不超过2个月。
2. 解冻:样品使用前应缓慢均衡至室温,避免加热使之融解。解冻后的样品应尽快使用,避免反复冻融。
3. 注意事项:在样品收集、处理及保存过程中,应严格遵守无菌操作规范,确保样品的纯度和稳定性。同时,根据实验需求合理预估样品量,避免浪费。
以上信息仅供参考,具体操作请参照试剂盒说明书及实验室标准操作流程。